肝缺血(HI)小鼠模型

Mouse Model for Hepatic Ischemia (HI)

Hepatic ischemia/reperfusion; Liver ischemia

  • 编号DSI527Mu01
  • 物种Mus musculus (Mouse,小鼠) 相同的名称,不同的物种。
  • 原型物种
  • 来源缺血再灌注肝损伤
  • 模式动物品系SPF级Balb/c小鼠,雄性,周龄为6w~8w,体重为20g-25g。
  • 实验分组实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。
  • 实验周期4-6 weeks
  • 建模方法1 小鼠术前12 h禁食,自由饮水。
    2 3%戊巴比妥钠80mg/kg腹腔注射麻醉,麻醉成功后将小鼠平躺在手术台上胶带固定四肢,将小鼠腹部术去毛,用碘酒和75%乙醇术区消毒。
    3 取腹正中切口1cm,打开腹腔,小心分离出肝脏供血的门静脉和肝动脉。
    4 用无创血管夹夹闭门静脉和肝动脉,0.5min后,肉眼可见阻断叶明显变白,说明阻断成功,用止血钳夹闭皮肤切口临时关闭腹腔,同时将小鼠放在37℃恒温加热垫上保温。
    5 完成持续缺血60min后,重新打开腹腔,迅速取出血管夹,恢复缺血肝血流,0.5min左右可见缺血区肝脏由白色逐渐恢复为鲜红色表明再灌注成功,逐层缝合腹腔肌肉和皮肤关闭腹腔,完成手术。待小鼠清醒后放回饲养室饲养,密切关注小鼠的状态及生存状况并做好记录。
    4.注意事项
    1 分离肝门时用棉签分离,可避免对肝脏的损伤
    2术前禁食有利于手术进行
    3阻断血流要一次成功,否则会造成缺血预处理,减轻损伤程度
    4取材时镊子不要损伤肝脏
  • 应用用于研究肝部损伤模型
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  • 规格 每例
  • 价格 ¥ 480
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  • 肝缺血(HI)小鼠模型 产品包装(模拟)
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  • 肝缺血(HI)小鼠模型 Fig. Analysis of Flow cytometric
  • Certificate 通过ISO 9001、ISO 13485质量体系认证

模型评价

模型评价
肝脏缺血损伤评分:
0分:无肝细胞损伤
1分:轻度损伤,特点为细胞质空泡化,病灶核固缩
2分:中度损伤,血窦膨胀,细胞溶质空泡化,细胞边界模糊
3分:中度到重度损伤,凝固性坏死,大量血窦膨胀,红细胞渗出到肝锁,嗜伊红细胞增多,中性白细胞着边(附着于血管壁)
4分:严重坏死,失去肝脏结构,肝索崩解,出血,嗜中性粒细胞渗入

组织病理学

组织病理学
取肝左叶组织1.5cm×1cm×0.2cm于4%多聚甲醛溶液中固定24h后脱水,包埋,进行石蜡切片后行HE染色,tunel染色。作坏死评分。肝小叶结构严重破坏,网状纤维支架塌陷,肝细胞坏死,空泡变样,肝细胞索、肝窦充血肿胀,边界不清,周围有炎性细胞浸润。

标志因子水平

生化指标检测:分别检测术后0h、3h、6h、12h、24h及72h小鼠鼠血清中ALT(谷丙转氨酶)、AST(天门冬氨酸氨基转移酶)的水平,γ-谷氨酰基转移酶(GGT),总胆红素(T-Bil),直接胆红素(D-Bil),间接胆红素(I-Bil),总胆汁酸(TBA) 。

流式检测:
1. 样本前处理
①剪碎:将消化液中的组织充分剪碎
②加入消化液:每个肝组织加入5ml消化液
③消化:37℃消化 45min
④ 中止:消化完的组织加入终浓度为10%FBS的1640 10ml,终止酶反应。
⑤过滤:将组织悬液经200目滤网过滤
⑥洗涤:收集单细胞悬液至于50ml EP管中,2000rpm 离心10min。
⑦叠层:用小鼠淋巴细胞分离液叠层处理
⑧ 收细胞:吸取位于中间的透明细胞层,FACs buffer 离心洗涤细胞一次。

2. 流式染色:
①FcR封闭:加入1% FcR 阻断剂(anti CD16/32 antibody),每样本100ul。4℃ 孵育30min,FACs buffer 离心洗涤。
②样本表面抗体工作液:
配置混合抗体工作液,每样本100ul;
加入抗体工作液后,4℃ 孵育避光30min,FACs buffer 离心洗涤。
PerCP anti-mouse CD11b
PE/Cy7 anti-mouse Ly-6G
FITC anti-mouse CD45
PE anti-mouse F4/80

3.样本胞内染色:
加入固定破膜液50ul,用枪头轻柔吹打重悬,室温避光45min。完成后,加入1x perm/wash buffer洗涤。
4.染色完成,重悬细胞:
样本染色完成(每样本使用200ul FACs buffer重悬),4℃ 避光保存,待上机。
5.流式上机:
上机样本,收集总数目50万/细胞。

统计学分析

应用SPSS软件进行统计分析,计量资料以均数±标准差(x ±s)表示,采用t检验,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05表示有显

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编号 适用物种:Mus musculus (Mouse,小鼠) 应用(仅供研究使用,不用于临床诊断!)
DSI527Mu01 肝缺血(HI)小鼠模型 用于研究肝部损伤模型
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